方法與原理：
生化需氧量是指在規定條件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物質，特別是有機物所進行化學過程中消耗溶解氧的量。BOD5是指在20℃培養5d分別測定樣品培養前后的溶解氧，二者之差即為BOD5值，以氧的mg/L表示，測試范圍2mg/l～6000mg/l
儀器
恒溫培養箱
20ml系口玻璃瓶
1000ml量筒
玻璃攪棒：棒的長度長于普通玻璃棒，在棒的底端固定一個直徑比量筒底小，并帶有幾個小孔的硬橡膠板。
溶解氧瓶：250ml，帶有磨口玻璃塞并且有供水封用的鐘形口。
移液管：供分取水樣和添加稀釋水用。
試劑
磷酸鹽緩沖溶液：將8.5g磷酸二氫鉀，21.75g*，33.4g七水合*和1.7g氯化銨溶于水中，稀釋至1000ml，此溶液的pH值應為7.2
*溶液：將22.5g七水合*溶于水中，稀釋至1000ml。
氯化鈣溶液：將27.5無水氯化鈣溶于水，稀釋1000mL
氯化鐵溶液：將0.25g 六水合氯化鐵（FeCl3·6H2O）溶于水中稀釋至1000ml
鹽酸溶液：將40ml（=1.18mg/l）鹽酸溶于水，稀釋至1000ml
氫氧化鈉溶液：將20g氫氧化鈉溶于水中，稀釋至1000ml。
亞硫酸鈉溶液：將1.575g亞硫酸溶于水中，稀釋至1000ml。
葡萄糖-*標準溶液：將葡萄糖和*在103℃干燥1h后，各稱取150mg溶于水中，移入1000ml容量瓶內稀釋至標線，混合均勻。此標準溶液臨用前配制。
稀釋水：在5-20L玻璃瓶內裝入一定量水。控制水溫在20℃左右，然后用無油空氣壓縮機，將吸入的空氣經活性碳吸附管及洗滌管后，導入稀釋水內曝氣2.8h。使稀釋水中的溶解氧接近飽和。放置于20℃培養箱中放置數小時。使水中的溶解氧達到8mg/l左右，臨用前每升加入氯化鈣、氯化鐵溶液。磷酸鹽緩沖液1ml，并混合均勻的PH值為7.2。其BOD5應為小于0.2mg/l.
接種液：城市污水，在室溫下放置一晝夜，取上清液使用。
接種稀釋水：分取適量接種液，加入稀釋中、混勻。每升稀釋水中接種液加入量為：生活污水1～10ml.接種液配置后立即使用。
步驟
水樣的預處理
調節pH值
保持20℃的水樣溫度。
水樣測定：按照選定的稀釋比例，用虹吸沿筒壁先引入部分稀釋水于1000ml中。加入需要量的均勻水樣。再加入稀釋水至800ml，攪拌時防止出現氣泡。另外取兩個溶解氧瓶用虹吸法裝滿稀釋水作為空白試驗，測定5d前后的溶解氧。
計算
不經稀釋直接培養的水樣：
BOD5（mg/L）＝
式中：—水樣在培養前的溶解氧濃度（mg/L）;
—水樣經5d培養后，剩余溶解氧濃度（mg/L）。
經過稀釋后的水樣計算：
BOD5＝
式中：B1—稀釋水在培養前的溶解氧；
B2—稀釋在培養后的溶解氧；
f1—稀釋水在培養液中所占的比例；
f2—水樣在培養液中所占的比例。

式中：B1—稀釋水在培養前的溶解氧；

      B2—稀釋在培養后的溶解氧；

      f1—稀釋水在培養液中所占的比例；

      f2—水樣在培養液中所占的比例。

式中：B1—稀釋水在培養前的溶解氧；

      B2—稀釋在培養后的溶解氧；

      f1—稀釋水在培養液中所占的比例；

      f2—水樣在培養液中所占的比例。

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